革蘭氏染色法的步驟

革蘭氏染色法的步驟

生物顯微鏡做細菌鏡檢或者做菌種鑒定的時候都需要進行染色，革蘭氏染色是進行細菌觀察的一個非常常用的染色方式，現在就由上海巴拓儀器有限公司介紹一下革蘭氏染色法的步驟。

原理：革蘭氏染色法可將所有的細菌區分為革蘭氏陽性菌du（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）兩大類，是細菌學上最常用的鑒別染色法。該染色法之所以能將細菌分為G+菌和G-菌，是因為一般認為革蘭氏染色是基于細菌細胞壁特殊化學組分進行染色的。

步驟：

(一)涂片固定

在干凈的載玻片中央滴加一滴蒸餾水，用接種環進行無菌操作，挑取培養物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成菌懸液并涂布成直徑約1cm的薄層。

(二)染色

在固定過的涂片菌膜上滴加草酸銨結晶紫染液，染色液應完全覆蓋整個菌膜，染色1min。

(三)水洗

染色到一定的時間，拿住玻片使之成450角，用細小的水流把多余的染料沖洗掉，被菌體吸附的染料則保留。

(四)媒染

加碘液覆蓋涂面染1 min。在媒染處理時，媒染劑與染料形成不溶性的化合物，可增加染料和細菌的親和力。

(五)水洗，用吸水紙吸去水分

用細小的水流緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干。

(六)脫色

加95%酒精數滴，并輕輕搖動進行脫色， 20 s~30 s后再進行水洗，吸去水分。

(七)復染

蕃紅染色液染色10 s后， 自來水沖洗。

(八)干燥，鏡檢

染色的結果，革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。

擴展資料

標本干燥后即進行固定，固定的目的有三個：

(1)殺死微生物，固定細胞結構。

(2)保證菌體能更牢固的粘附在載玻片上，防止標本水洗時被水沖洗掉。

(3)改變染料對細胞的通透性，因為死的原生質比活的原生質易于染色。

參考資料來源：百度百科-革蘭氏染色法

參考資料來源：百度百科-革蘭氏染色